شمارش گلبولهای سفید
( White Blood Cell Count (WBC
لوازم مورد نیاز:
1-لام هموسیتومتر(ترجیحا نئوبار)
3-پیپت ملانژورسفیدکه درحباب آن یک مهره سفیدوجود دارد .(white bead in the bulb )این پیپت برای رقیق کردن خون بکار میرود.
4-لوله لاستیکی (مکنده)لوله لاستیکی حدود25 سانتیمتر
5-ماده رقیق کننده:محلول مارکانو
محلول اسیداستیک 2 سی سی + آب مقطر 97 سی سی
+ 1 سی سی محلول کریستال ویوله یا بلودومتیلن1% ، خوب مخلوط وسپس با کاغذ صافی صاف کردد.
محلول رقیق کننده باید تازه به تازه تهیه شود.
6-میکروسکپ
روی پیپت ملانژور سفید سه عدد 0.5 و 1 و 11 قرار دارد
طرزرقیق کردن خون:
یک ملانژوربا( مهره سفید) تمیز وخشک انتخاب می کنیم،لوله لاستیکی مکنده رابه ته ملانژور وصل میکنیم .نمونه خون
را خوب مخلوط کرده سر دیگر لوله را دردهان میگذاریم ،نوک ملانژور را داخل خون میگذاریم.ملانژور را افقی نگه
میداریم خون را تا علامت0.5 داخل ملانژورمیکشیم ،خون نوک واطراف ملانژور را با گاز خوب پاک میکنیم و ازورودحباب هوا به داخل ملانژور جلوگیری به عمل میاوریم
برای اینکه تمام محلول آلوده نشود.قبلا چند سی سی از محلول رقیق کننده (محلول مارکانو)را دریک بشر کوچک میریزیم.نوک ملانژور را داخل محلول مارکانو قرار میدهیم ، ماده رقیق کننده را تا11 به درون ملانژور میکشیم ،لوله لاستیکی راازملانژور جا میکنیم. سر وته ملانژور رابین دو انگشت شست وسبابه نگه میداریم.به مدت یک دقیقه محتوی ملانژور را مخلوط میکنیم.سپس ملانژور را بمدت 5 دقیقه روی شیکر(ویبراتور) قرار میدهیم.
توجه!اگر بعد از این مدت محتوی ملانژوربلافاصله برای شمارش مورد استفاده قرارنگیرد مخلوط کردن مجدد قبل ازاستفاده ضروری است.
لام هموسیتومترتمیز را روی میزصاف و تراز قرار میدهیم ،لامل سنگین تمیز را روی لام قرار میدهیم .
ملانژور راعمودی میگیریم 4-5قطره اول محتوی ملانژور را دور میریزیم ،با گذاشتن انگشت سبابه در ته ملانژور ریختن محتوی ملانژور را در اختیار میگیریم. یک قطره کوچک از محتوی ملانژور را توسط قراردادن نوک ملانژوردر بین لام ولامل هدایت میکنیم.بطوریکه مخلوط خون وماده رقیق کننده به منطقه شمارش نفوذ کند.اگر ماده به درون شیارها نفوذ کند بایدلام را شسته خشک کرده مجددا مورد استفاده قرار میدهیم.
چند دقیقه لام را ثابت میگذاریم تاسلولهابیحرکت شوند. لام را زیر میکروسکوپ قرار میدهیم با عدسی ابژکتیو 10xمورد مطالعه قرار میدهیم .چهار مربع بزرگ واقع در چهار گوشه صفحه مدرج را شمارش میکنیم.
محاسبه تعداد گلبولهای سفید:
هر ضلع مربع بزرگ 1 میلیمتر است .
وقتی لامل روی لام قرار میگیرد دقیقا ارتفاع (فاصله)لام تا لامل 0.1میلی متر می شود
حجم واقع دریک مربع بزرگ =۱X ۱ X ۰/۱ = یکدهم میلی مترمکعب.
چون گلبولهای چهارخانه مکعب مستطیل را شمارش کرده ایم حجم
چهارمکعب مستطیل میشود 0.1×4=0.4 میلی متر مکعب.
ضریب رقت بوسیله ملانژور 1/20است یعنی خون به نسبت یک به بیست رقیق میشود.
در اصل:ما گلبول های سفیدخون رادرحجمی برابربا 1/50=
0.4X1/20 یک پنجاهم میلی متر مکعب حساب میکنیم در نتیجه
واضح است باید تعداد کل گلبولهای شمارش شده در چهار مربع در عدد 50 ضرب شود.
مثال تعداد گلبولهای شمارش شده درچهار مربع بزرگ
واقع در چهارگوشه185 عدد باشد ، تعدادکل گلبولهای سفید خون 4*185=9250 عدد در میلی مترمکعب میشود.
تمام وسایل و مواد فوق در فروشگاه اوژن یافت میشود.
